根據細胞培養時是否附著在支持介質上，分為貼壁細胞和懸浮細胞。

貼壁(bi)細胞(bao)天生(sheng)容易(yi)貼壁，這為(wei)后續實(shi)驗(yan)提(ti)供了便利(li)條件。

但是懸浮細胞在培養基中懸浮生長，如何像貼壁細胞一樣好操作，一直是大家的夢想。

一 傳統(tong)的方法：細胞準備與固(gu)定(ding)

（1）單(dan)層生長細(xi)胞：取對(dui)數(shu)生長細(xi)胞，用0.25％胰(yi)蛋白(bai)酶消(xiao)化，制成單(dan)細胞(bao)懸液。將細胞(bao)接種(zhong)到預先放置幾張6×22mm蓋玻片(pian)的培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養皿中，置二氧化碳培(pei)養箱培(pei)養1-3天(tian)，待細胞(bao)接近(jin)長成單層(ceng)，取出蓋玻片，進(jin)入(ru)PBS（0.01 mol/L,pH7.4）洗2次(ci)，然后根據實(shi)驗(yan)目(mu)的(de)，選(xuan)擇適當(dang)固(gu)(gu)定劑固(gu)(gu)定細胞(bao)。常用(yong)固(gu)(gu)定劑有：95％乙醇（固(gu)(gu)定時間10-30min），丙酮（5－10min）等。

（2) 懸浮(fu)生長細胞：取對數生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm，5min）2次，或(huo)用細胞離心甩片機(ji)制備細胞片或(huo)直接制備細胞涂片，把細胞片浸入(ru)95％乙醇或(huo)丙酮(tong)中固定。

2 將已經(jing)固定的細胞玻片放入(ru)蓋片染色缸，用PBS振洗5min，取出(chu)吹干。

3 滴加(jia)適當稀釋的特異性(xing)抗體，置于濕盒內，37度保(bao)溫(wen)30－60min或度冰箱過夜

4 PBS振洗(xi)3次，每(mei)次5min，吹干。

5 滴加(jia)適當(dang)稀釋的熒(ying)光素標記抗體(ti)，置于濕盒內(nei)，37度保溫30－60min。

6 PBS振洗(xi)2次，每次5min，然后用蒸(zheng)餾水振洗(xi)1次。

7 50％緩(huan)沖甘油封片。

二 Shi-Fix玻片最新方法

Shi-Fix玻片(pian)，可以讓我們像貼壁細(xi)胞一樣對懸浮細(xi)胞做免疫熒光，如下是(shi)使用Shi-Fix做的實驗結果(guo)。簡單的四(si)部，告別傳(chuan)統的自(zi)己(ji)涂片(pian)，自(zi)己(ji)甩片(pian)，自(zi)己(ji)烤片(pian)等作坊式方(fang)法(fa)。