細(xi)胞(bao)(bao)培養類(lei)型可以分(fen)為(wei)貼壁細(xi)胞(bao)(bao)和懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)(bao)兩種，只有極(ji)少數類(lei)型細(xi)胞(bao)(bao)同時存在兩種狀態。
懸(xuan)浮細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)是指不需(xu)要(yao)(yao)依(yi)賴支(zhi)持(chi)物，可在培(pei)(pei)養(yang)(yang)基中以懸(xuan)浮狀態生(sheng)長的(de)一類細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，如(ru)淋巴細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)和大部分血液系統來(lai)源(yuan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)。（如(ru)小鼠白血病(bing)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)WEHI-3, 人(ren)白血病(bing)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)K-562, HL-60）。工業(ye)上(shang)也(ye)有越來(lai)越多的(de)貼壁傳(chuan)代(dai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)被馴(xun)化出來(lai)，進行全(quan)懸(xuan)浮的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)。目前在工業(ye)中應用的(de)主(zhu)(zhu)要(yao)(yao)有SP2/0、NS0、CHO、BHK和HEK293細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)等，它們主(zhu)(zhu)要(yao)(yao)用于重組蛋白質生(sheng)產(chan)；在獸用生(sheng)物制品中常用的(de)傳(chuan)代(dai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)主(zhu)(zhu)要(yao)(yao)有采用全(quan)懸(xuan)浮培(pei)(pei)養(yang)(yang)的(de)BHK21細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、MDCK細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)；及借助微(wei)載(zai)體懸(xuan)浮培(pei)(pei)養(yang)(yang)的(de)Vero細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、PK細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、ST細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、 Marc145細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)等，每種(zhong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)特性(xing)都(dou)不同。
一般情況(kuang)下，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)(bao)相較于貼壁細(xi)胞(bao)(bao)的處理(li)更加簡單(dan)一些，因(yin)為(wei)懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)(bao)傳代時無(wu)須胰酶(mei)消化。但這(zhe)并不意(yi)味著懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)(bao)比貼壁細(xi)胞(bao)(bao)好(hao)養，對新(xin)手來說，反而更具挑戰(zhan)性。總是會遇到(dao)各(ge)種(zhong)各(ge)樣的問(wen)(wen)題：比如，為(wei)什么總是出(chu)現死細(xi)胞(bao)(bao)和細(xi)胞(bao)(bao)分化；說好(hao)了(le)傳代很easy的，結果會出(chu)現分化；養好(hao)了(le)凍(dong)存復蘇(su)后(hou)又(you)出(chu)現問(wen)(wen)題了(le)！
養好懸浮細胞，有如下大眾經(jing)驗分享。
要點一：足夠的耐心，這是非常必要的
很多(duo)懸(xuan)浮細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)在剛從凍(dong)存狀態復(fu)蘇時活力是(shi)相對較差的，此(ci)時我們需要有足夠(gou)的耐心(xin)，等待(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)完(wan)成自我修(xiu)復(fu)進入對數增長期。比如THP-1（人(ren)單核細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)白血病(bing)）從解凍(dong)到(dao)恢(hui)(hui)復(fu)正(zheng)常(chang)增殖往往需要7-10天的恢(hui)(hui)復(fu)期；Jurkat，Clone E6-1(人(ren)T淋巴細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)白血病(bing)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao))復(fu)蘇后也(ye)需要5-7天才能恢(hui)(hui)復(fu)到(dao)凍(dong)存前(qian)的狀態。新手可能會在此(ci)期間放棄(qi)培(pei)(pei)(pei)養(yang)，所以(yi)，請多(duo)一點耐心(xin)哦！培(pei)(pei)(pei)養(yang)這類細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)也(ye)是(shi)培(pei)(pei)(pei)養(yang)耐心(xin)的過程呢！
要點二：接種密度的把握
一般來說，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)接種(zhong)時密(mi)度不(bu)應(ying)低(di)于50萬(wan)個/ML，很多懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)有密(mi)度依賴，密(mi)度低(di)導致(zhi)的(de)不(bu)增殖也(ye)是新手常見問題之一。當(dang)然，有極少數細(xi)胞(bao)在密(mi)度高時反而狀(zhuang)態變差(cha)，如W6/32（小鼠B細(xi)胞(bao)雜(za)交(jiao)瘤細(xi)胞(bao)）。因此(ci)，培養不(bu)了解(jie)的(de)細(xi)胞(bao)前查找相關資料(liao)去掌握細(xi)胞(bao)特性非常重要。
要點三：換液方法及頻率
換液頻率(lv)不應(ying)該(gai)被限制得“明明白(bai)白(bai)"，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)是活(huo)物，在(zai)一個(ge)連續培(pei)養周期內，視細(xi)(xi)胞(bao)(bao)生長(chang)狀態可分多次添加補(bu)充培(pei)養基、葡(pu)萄糖(tang)等特定(ding)營養成份(fen)，維持細(xi)(xi)胞(bao)(bao)良(liang)好(hao)的生長(chang)狀態。懸浮培(pei)養過程中(zhong)，隨著細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的增(zeng)殖(zhi)，原有培(pei)養基中(zhong)營養物質(zhi)的消耗，代謝(xie)產物的增(zeng)加，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的活(huo)率(lv)會下(xia)降，及時補(bu)充營養物質(zhi)，使細(xi)(xi)胞(bao)(bao)處于一個(ge)相對良(liang)好(hao)的生存環境。切(qie)忌頻繁離心換液。參考換液方(fang)法：
①離(li)心全(quan)換液法
即通過離心（800-1000rpm，5min）去除全(quan)部舊的(de)培養(yang)基(ji)(ji)，更換新鮮(xian)培養(yang)基(ji)(ji)。該方法適(shi)合“皮實“好養(yang)的(de)懸浮(fu)細(xi)胞(bao)換液(ye)(如K562)，或者當前細(xi)胞(bao)狀態良(liang)好、密度較高導致培養(yang)基(ji)(ji)消耗(hao)較大的(de)情況。此方法的(de)優點是換液(ye)到位，能(neng)去除部分(fen)細(xi)胞(bao)碎片，但是同樣會對細(xi)胞(bao)造(zao)成(cheng)一定(ding)程度的(de)機械損傷。
②離心(xin)半換液(ye)法
即通過離心(xin)（800-1000rpm，5min）50%細胞懸液，更換50%體(ti)積(ji)的新鮮培養基。該方法適合比較(jiao)“矯情“難養的細胞（如thp-1），或者正在調整狀態中(zhong)、密度較(jiao)低但(dan)碎片較(jiao)多(duo)需要去除的情況。
③沉降換液法
即(ji)不使用離(li)(li)心機而是利用重(zhong)力(li)自然(ran)沉降的(de)(de)方法(fa)(fa)，將培養(yang)基(ji)與細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)分離(li)(li)，達到(dao)全部或(huo)部分更換新鮮培養(yang)基(ji)。但是其有(you)應用局限(xian)性—只適合能成一定大小(xiao)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)團(tuan)(tuan)（否則無法(fa)(fa)自然(ran)沉降，只能低速離(li)(li)心）的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，尤其是處(chu)理依賴細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)聚集(ji)才能增殖的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)時(shi)(shi)非(fei)常值得推薦(jian)，如NK-92、NK-92 MI、Jurkat。該(gai)方法(fa)(fa)能在換液過程中最大限(xian)度避免(mian)離(li)(li)心過程造成的(de)(de)機械損傷，同(tong)時(shi)(shi)保(bao)留聚集(ji)的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)團(tuan)(tuan)，并且去(qu)除細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)碎片也較為干(gan)凈。
固定懸浮細胞，有如下私房經驗分享。
養好懸浮細胞，需要用化合物等試劑刺激懸浮細胞，或者共培養。使用免疫熒光來檢查懸浮細胞，一直給很多新手，甚至高手造成心理陰影。如何固定好懸浮細胞？如何確保不掉片？甚至如何讓懸浮細胞貼壁來做實驗？是很多實驗者的奢望。懸浮細胞固定/免疫熒光專用玻片給帶來解決方案。
如(ru)下是一些懸浮細胞固定后(hou)做的免疫熒光(guang)圖(tu)片(pian)，可以參考。
